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pCr电泳图详细分析

扩增产物和maker点样于胶上,跑电泳,之后扫胶,通过与marker的对比看扩增产物条带大小是否与预测大小一样,另外看是否一个孔只跑出了一条带以看有没有杂质

在电泳的时候加上DNA的分子量marker,一般16S的大小都是1.5 kb吧(很久不做了,记不太清楚).如果有明显的目的条带而且大小也合适的话那就一般不会错,如果想要确定,可以将条带从胶中切下来,回收之后送去测序,就可以知道序列的详细信息了.另外你的目的如果只是判断DNA的提取是否成功的话,那么在提取DNA之后直接跑电泳就可以了,没有必要做PCR扩增16S.一般细菌基因组都在15~16k大小左右.

要求内参的亮度一致,才能比较基因表达差异半定量RT-PCR参照的做法一般3.电泳扫描后,计算灰度值,先用同一标本的内参和目的进行比较,然后用这个

在电泳的时候加上dna的分子量marker,一般16s的大小都是1.5 kb吧(很久不做了,记不太清楚).如果有明显的目的条带而且大小也合适的话那就一般不会错,如果想要确定,可以将条带从胶中切下来,回收之后送去测序,就可以知道序列的详细信息了.另外你的目的如果只是判断dna的提取是否成功的话,那么在提取dna之后直接跑电泳就可以了,没有必要做pcr扩增16s.一般细菌基因组都在15~16k大小左右.

说明扩增成功,目的条带大于100bp可以说明不是引物二聚体,但是扩增的量很少,可以增加引物量.阳性对照和阴性对照较为明显,所以虽然不亮的条带,但可以说明有东西PCR出来.内参很亮可能是引物设计的问题,目的基因引物结合能力不如内参强,或者上样量有问题.

看看是不是仪器的问题,中间和边上的孔温度不一样.你可以同一样品配上一批,再分成十来个管,放到PCR仪不同的位子,反应完后一起电泳,看一看结果是否一样.PCR说起来简单,但出问题了很难找到原因的.如果你小量配的话,比如引物加得量小,只有1ul左右的话,可能是加样误差引起的.这样你可以把通用的配上一大批分装冻起来,用量加入不通用的部分

半定量RT-PCR参照的做法一般有两种:1) 将要比较的两个样品的BETA-ACTIN 调成一样的亮度,然后就可以直接比较目的基因的亮度了.方法的结果比较直观,但较费事.2) 不进行调平,一个样品里将目的基因和BETA-ACTIN直接比较,

首先看第二泳道,能够看见两条带,一般的质粒跑完电泳都是这种情况,因为质粒容易开链,变成线性的,或者是半线性半环状,而环状的比线性的跑的快,所以上面那条浅的应该是开链的质粒,下面的是环状的质粒,不过不要紧,一般都是这样.看第三条泳带,说明你的目的条带大约在750bp.再看第四个泳带,靠近点样孔的是你切掉了目的基因的质粒,此时为线性的质粒,能够看见它比第二条泳道那条亮带跑的要慢一些,这是对的结果.还是因为环状的比线性的跑的快.而第四条泳带下面那个浅带,是你的目的基因,它与你PCR产物大小一样.因此说明了你的重组质粒构建成功,目的基因已经连入质粒了.恭喜你!第一次做就能做成这样,羡慕啊.

1. 一般PCR或RT-PCR的产物电泳时应该用>1%的琼脂糖凝胶进行电泳,2. 事实上,很多情况下胶跑得不够漂亮跟一些微不足道的细节有关,有时候做胶前如果梳子没洗干净,胶的孔就不够整齐;3. 还有点样时,不要让枪头戳到孔的边沿,尤其是前沿,如果戳缺一点,跑出来的胶就是弯曲的.4. 最好不要用这么长的胶跑,等点到最后面的样时,前面的样都有点扩散了,跑的不是很漂亮.

题干不详

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